- 人牙龈干细胞(原代细胞)
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人牙龈干细胞
细胞基本属性:
产品名称
人牙龈干细胞(原代细胞)
组织来源
食管
种属
人
生长特性
贴壁生长
形态特征
成纤维细胞样
英文名称
Human gingival stem cells
货号
EY-XY3378
规格
5x105cells/T25或1mL冻存管
质量检测:CD105免疫荧光染色为阳性,纯度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
产品规格:5x105cells/T25细胞培养瓶
培养基:人牙龈干细胞专用培养基
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
换液频率:每2-3天换液一次
消化液:0.25%
产品货期现货,1周左右
运输方式T25培养瓶/ 顺丰快递(包邮)
供应限制仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
背景介绍:
干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,它包括胚胎干细胞和成体干细胞。目前已经成功分离培养包括来自骨髓、肌肉、神经、上皮等组织的成体干细胞。牙龈干细胞是近年来从牙龈组织中分离的具有干细胞特性的前体细胞,具有自我更新能力、多向分化潜能及免疫调节功能,在干细胞领域具有广阔的应用前景。
原代细胞的分离培养:
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官,让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体,它们的生物性状尚未发生很大的改变,在一定程度上可反映它们在体内的状态,表现出来源组织或细胞的特性, 因此用于药物实验,尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等,是的工具。常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。
(一)组织块培养法
许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养,因为方法简单,细胞也较容易生长。尤其是培养心肌,有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后, 即可进行传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台/无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
(1) 在无菌条件下,取待培养的组织适量,置入小烧杯中, 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次,去掉组织块表面的血污。
(2)用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
(3)再用Hanks 溶液反复漂洗, 直至液体不混浊为止。等组织块下沉,将烧杯倾斜,用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
(4)用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml、200μg/ml)的培养液再清洗,用吸管吸干后加入5ml 含20%血清的培养液。
(5)用弯头吸管吸取组织小块,均匀地置于培养皿内表面,吸去多余的培养液,各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖,做好标记, 置37°C 的CO2培养箱内。
(6) 2~4h 后,于超净工作台中,缓缓地向培养皿中加入上述含20%血清及双抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml )的培养液少量,以使组织块浸没在培养液中。
(7)轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱, 如无特殊情况,不必观察。1~2 周后,可观察到细胞从组织块边缘长出,形成生长晕。
(9) 一般说来,若培养液无明显改变, 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面,即可进行传代培养。
操作方法:
组织块直接培养法(原代细胞培养实验)
材料与仪器
【动物】选择大约一半足孕时间的胚胎,10-13天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞,成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。每组小鼠胚胎1个【实验材料】每组的超净台中有以下物品:1.50ml配制好的RPMI1640培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS)1瓶;100ml 0.25%瓶;PBS(-)1瓶2.100ml灭菌烧杯2个;3、50ml离心筒2个4、灭菌培养皿1个,细胞培养瓶1个5、1ml,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个6、细胞计数板1块;7、灭好菌的镊子1把,剪刀1把;8、酒精灯1台;
步骤
1) 胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠)2)将1-2个胚胎转移至一个小的无菌培养皿中,用新的无菌剪刀小心地绞碎胚胎,用PBS漂洗。3)在无菌状态下,将绞碎的胚胎转移于一50ml的无菌离心筒中,加入40ml 0.25%的无菌,用搅拌棒轻轻搅动。4)在温暖的环境中或置于37°C培养箱中轻轻摇动15分钟。5)让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降,将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中,该管内按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以灭活,。6)加人新鲜溶液(见前述步骤)于含有残留未消化组织块的原来的50ml离心筒中,重复步骤4和5。7)离心混合的细胞悬液,1200r/rain,5分钟,弃上清。8)用新鲜的无菌PBS重悬沉淀的细胞,按步骤7再次离心。9)用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止。
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