- 小鼠结肠黏膜上皮细胞永生化
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传代培养操作步骤：
一、贴壁培养
细胞传代培养操作步骤如下：
（1）传代前在倒置显微镜下观察细胞形态和生长密度，当细胞生长密度达到80%~90%时，即可进行传代。
（2）吸掉或倒掉培养瓶内的培养液。加入PBS清洗1~2次，左右轻轻摇晃后弃掉。
（3）根据培养瓶大小向瓶内加入适量含EDTA的，一般应覆盖整个培养瓶底。
（4）把培养瓶放入37℃ CO2培养箱进行消化，2~5min后拿出放在倒置显微镜下进行观察，当发现有70%~80%细胞收缩变圆、细胞间隙变大时，再轻轻拍打培养瓶使剩余细胞脱落，然后立即加入2倍量的培养液中止消化，使用吸头轻轻吹打，混合均匀，以防消化过度。
（5）吸出所有细胞悬液至离心管内，1000rpm/min离心3~5min。
（6）弃上清，加入适量培养液重悬细胞，轻轻吹打混匀，使细胞均匀分散。
（7）用吸头吸取适量细胞悬液，以适宜的密度接种于新的培养瓶中，补足培养液，摇匀，放置于37℃ CO2培养箱中进行培养。
（8）根据细胞生长状态确定换液或传代时间，甚至进行细胞冻存。
小鼠结肠黏膜上皮细胞永生化
细胞基本属性：
产品名称
小鼠结肠黏膜上皮细胞永生化（免疫荧光鉴定）
组织来源
正常结肠组织
种属
小鼠
生长特性
贴壁生长
细胞代数
10代以内
细胞形态
铺路石状细胞，不规则细胞
支原体检测 无 冻存条件
无血清冻存液，液氮储存
细胞详细介绍：
背景简介;结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M"，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：粘膜（上皮层，固有层，粘膜肌层），粘膜下层，肌层，外膜。结肠黏膜上皮在环境或遗传等多种致癌因素作用下导致结肠癌，是常见的恶性肿瘤之一。因此，体外培养结肠黏膜上皮细胞为研究进一步结肠癌等疾病提供了前提和基础。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。
细胞鉴定;细胞角蛋白-18（CK-18）免疫荧光染色为阳性，纯度高于90%
细胞规格;1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测;无
培养基;小鼠结肠黏膜上皮细胞永生化细胞专用培养基（DMEM/F12K+10%FBS+PS)
培养条件;气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件无血清冻存液，液氮储
发货方式复苏发货（免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递
供应限制仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
特别说明以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主
二、悬浮细胞
传代培养操作步骤如下：
一般实验室中悬浮细胞传代方法分为直接传代法和离心传代法（培养液中含有细胞碎片的情况下）。当在显微镜下观察到悬浮细胞已经长满至80%~90%（细胞悬液变黄）时，即可进行传代。
（1）严格进行无菌操作，所用一切试剂及耗材均应无菌，且须在无菌超净工作台中紫外照射30min以上，以免细胞发生污染。
（2）所用培养液必须适宜细胞生存和生长。来源于不同动物种类、组织类型的细胞，对培养液的要求不一样，必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。
（3）胎牛血清对于维持细胞生存，促进细胞生长起着关键作用。可根据文献或预实验选择合适的胎牛血清。一旦确定，就应保持用至实验完成。
（4）消化细胞时应避免消化时间过短导致消化不收集到的细胞数量少，或消化时间过长导致细胞成团块样絮状游离，这时的细胞已有损伤或死亡，影响细胞数量和实验进度。
（5）细胞离心的时候应避免离心力过小收集的细胞数量不够，或离心力过大对细胞产生损伤。离心后的细胞沉淀弃去上清后，应先弹散细胞沉淀，再加入培养液重悬，这样比直接吹打对细胞损伤小，可以提高细胞活率。
（6）吹打细胞时应尽量避免细胞的产生，以免损伤细胞，影响细胞状态（吹打过程中残留部分液体在吸头内可以减少气泡的产生）。
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