传代培养操作步骤：

一、贴壁培养

细胞传代培养操作步骤如下：

（1）传代前在倒置显微镜下观察细胞形态和生长密度，当细胞生长密度达到80%~90%时，即可进行传代。

（2）吸掉或倒掉培养瓶内的培养液。加入PBS清洗1~2次，左右轻轻摇晃后弃掉。

（3）根据培养瓶大小向瓶内加入适量含EDTA的，一般应覆盖整个培养瓶底。

（4）把培养瓶放入37℃ CO2培养箱进行消化，2~5min后拿出放在倒置显微镜下进行观察，当发现有70%~80%细胞收缩变圆、细胞间隙变大时，再轻轻拍打培养瓶使剩余细胞脱落，然后立即加入2倍量的培养液中止消化，使用吸头轻轻吹打，混合均匀，以防消化过度。

（5）吸出所有细胞悬液至离心管内，1000rpm/min离心3~5min。

（6）弃上清，加入适量培养液重悬细胞，轻轻吹打混匀，使细胞均匀分散。

（7）用吸头吸取适量细胞悬液，以适宜的密度接种于新的培养瓶中，补足培养液，摇匀，放置于37℃ CO2培养箱中进行培养。

（8）根据细胞生长状态确定换液或传代时间，甚至进行细胞冻存。

NR8383大鼠肺泡巨噬细胞

细胞别称　NR-8383; NR 8383; NR8383.1; AgC11x3A; Normal Rat, August 3, 1983

背景介绍;NR8383 (正常大鼠，1983年)来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后，不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞，并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性，吞噬酵母多糖和铜绿，非特异性脂酶活性，Fc受体，氧化降解；分泌IL-1, TGF-β和IL-6，可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应素，分泌TGF-β前体。在刺激下，TGF –β mRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10 钠克/毫升的LPS水平抑制增生达50%。 即使达到0.001毫克/毫升的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源，可以用于体外研究巨响细胞相关活性。

生物安全等级;1

细胞规格;1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

支原体检测;无

保藏机构;ATCC; CRL-2192

培养基;85%F12K+15% FBS+PS

培养条件;气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件无血清冻存液，液氮储

发货方式复苏发货（免运输费用）/  冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

供应限制仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

特别说明以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主

二、悬浮细胞

传代培养操作步骤如下：

一般实验室中悬浮细胞传代方法分为直接传代法和离心传代法（培养液中含有细胞碎片的情况下）。当在显微镜下观察到悬浮细胞已经长满至80%~90%（细胞悬液变黄）时，即可进行传代。

（1）严格进行无菌操作，所用一切试剂及耗材均应无菌，且须在无菌超净工作台中紫外照射30min以上，以免细胞发生污染。

（2）所用培养液必须适宜细胞生存和生长。来源于不同动物种类、组织类型的细胞，对培养液的要求不一样，必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。

（3）胎牛血清对于维持细胞生存，促进细胞生长起着关键作用。可根据文献或预实验选择合适的胎牛血清。一旦确定，就应保持用至实验完成。

（4）消化细胞时应避免消化时间过短导致消化不收集到的细胞数量少，或消化时间过长导致细胞成团块样絮状游离，这时的细胞已有损伤或死亡，影响细胞数量和实验进度。

（5）细胞离心的时候应避免离心力过小收集的细胞数量不够，或离心力过大对细胞产生损伤。离心后的细胞沉淀弃去上清后，应先弹散细胞沉淀，再加入培养液重悬，这样比直接吹打对细胞损伤小，可以提高细胞活率。

（6）吹打细胞时应尽量避免细胞的产生，以免损伤细胞，影响细胞状态（吹打过程中残留部分液体在吸头内可以减少气泡的产生）。

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NR8383大鼠肺泡巨噬细胞液泡蛋白分选蛋白37C抗体