产品背景：

1975年E.A. Carswell等人发现接种卡介苗的小鼠注射细菌脂多糖后，血清中出现一种能使多种肿瘤发生出血性坏死的物质，将其命名为肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF)。八十年代人们发现其在消耗症中起了重要作用，又称恶液质素。TNF主要由活化的巨噬细胞，NK细胞及T淋巴细胞产生。1985年Shalaby把巨噬细胞产生的TNF命名为TNF-α，把T淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxin，LT)命名为TNF-β。虽然TNF-α与TNF-β仅有约30%的同源性，但它们却拥有共同的受体。TNF-α的生物学活性:占TNF总活性:的70 %～95 %，因此目前常说的TNF多指TNF-α。1984年TNF基因的克隆开辟了临床试验的时代，是第一个用于肿瘤生物疗法的细胞因子，但因其缺少靶向性且有严重的副作用，目前仅用于局部治疗。

产品特点：

更简单：无需抗原抗体反应，基于小分子化学反应的检测方法简单高效，反应仅需要几分钟。

更灵敏：无需抗体，检测染料仅BrdU抗体的1/500，很容易扩散，即便是单个增殖细胞也能准确检测。

更快速：无需过夜，省却了抗原抗体反应的复杂繁琐步骤，完成整个检测周期仅需2.5小时。

更准确：无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)，可有效避免变性带来的样品损伤，确保细胞核边缘清晰完整。

更兼容：对样品几乎无损伤，更容易与多种抗体或荧光蛋白同时标记，能够同时检测细胞其他性状特征

实验步骤：

1.细胞培养

（以6孔板为参考，其他培养孔可根据实验需要进行适当调整。）每孔1x10^5-3x10^6细胞接种于6孔板中，培养至正常生长阶段。

注：细胞接种量，可根据细胞大小、生长速度、以及实验处理周期等调整。

2.细胞干预或者处理

（选做）可以根据实验需要对细胞进行药物或者其他刺激干预处理。

3.细胞共孵育培养

根据预实验结果，用细胞培养基按比例稀释溶液，或者按比例在孔板培养液中加入适量的溶液与细胞共同孵育，同时设置不添加组作为阴性对照组。每孔加入配制的稀释后的培养液共同孵育2h，去除旧培养液。

注意事项：

1.由于使用96孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了。

2.溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

3.一般4ºC避光保存两周内有效，保存在-20度长期保存，避免反复冻融，小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当变为灰绿色时就不能再用了。

4.Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。

5.孵育时，须避光。

6.有致癌性，用的时候小心，有条件带那种透明的簿膜手套。配成的需要无菌，对菌很敏感。

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