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背景：

白细胞介素4（IL-4）是一种多效性细胞因子，主要由活化的T淋巴细胞，嗜碱性粒细胞和肥大细胞产生。它是一种糖基化多肽，包含三个链内二硫键，并具有一个成束的四个α-螺旋结构，除了在介导炎症性过敏反应中中发挥作用外，在肿瘤和自身免疫性疾病的治疗和研究中也起着重要作用。小鼠的IL-4由24个aa信号序列:合成。IL-4对多种细胞具有多种免疫应答调节功能，在调节同种型转换、诱导B淋巴细胞产生IgE、诱导前体T辅助细胞分化等方面具有重要作用。IL-4可与膜结合型以及分泌型可溶性IL-4受体结合。

标记：

1.将细胞培养基与EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU标记培养基。

2.提前将2×EdU标记培养基预热，然后将150微升2×EdU标记培养基与等体积细胞培养基混合，获得1×EdU溶液。

【注】：①不建议替换全部培养基，这样可能会影响细胞增殖的速度。②配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜。

3.孵育细胞2 h，弃培养基。

【注】：①培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态。②大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2 h的孵育时间。

4.以1xPBS清洗细胞两次，每次5 min, 以除去未掺入DNA的EdU残留。

【注】：对于贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。

实验步骤：

1. 将细胞以 104-105 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板 中，加入 100μL 培养基，含或不含待测化合物。在 CO2 培养箱中在 37℃ 下培养细胞 24 小时。

2. 向板中加入 10μL 不同浓度的待测物质。

3. 在培养箱中将培养板培养适当时间（如 6、12、24 或 48 小时）。

4. 向板的每个孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要将气泡引入孔中。

5. 将平板在培养箱中孵育 1-4 小时。

6. 在读板之前，在定轨振荡器上轻轻混匀。

7. 使用酶标仪测量 450nm 处的吸光度。

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