商品属性：

背景：

GDF-3（以前称为 Vgr-2）是一种 TGF-beta 超家族成员，属于生长/分化因子家族。因子家族的成员。GDF-3 在未分化的胚胎干（ES）细胞、白色脂肪组织和大脑中表达。366氨基酸（aa）的小鼠 GDF-3 含有 22 aa 的信号序列:、230 aa 的前肽和 114 aa 的成熟蛋白。含有一个潜在的 N-糖基化位点。成熟区包含一个半胱结结构，该结构在整个的半胱结结构。然而，它缺少负责形成分子间二硫键的第四个半胱，因此 GDF-3 可能存在一个 N.键，因此 GDF-3 可能以非共价的同源二聚体形式存在。成熟的人类 GDF-3 与小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83% 和 83% aa 的序列:相同性。小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83%、83% aa 的序列:相同性。大部分 GDF-3 以未水解的前体形式存在。未加工的前体和成熟的前体似乎都有活性:，但活性:可能有所不同。所有形式都能对抗 BMPs。在 ES 细胞中，抑制 BMP2 信号传导的GDF-3 可维持多能性。GDF-3 还影响早期细胞命运的决定；例如，缺失小鼠 GDF-3会导致胃前期胚胎的前内脏内胚层出现缺陷。在胚胎发生过程中，GDF-3 与 GDF-1 相互合作。

标记：

1.将细胞培养基与EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU标记培养基。

2.提前将2×EdU标记培养基预热，然后将150微升2×EdU标记培养基与等体积细胞培养基混合，获得1×EdU溶液。

【注】：①不建议替换全部培养基，这样可能会影响细胞增殖的速度。②配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜。

3.孵育细胞2 h，弃培养基。

【注】：①培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态。②大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2 h的孵育时间。

4.以1xPBS清洗细胞两次，每次5 min, 以除去未掺入DNA的EdU残留。

【注】：对于贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。

实验步骤：

1. 将细胞以 104-105 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板 中，加入 100μL 培养基，含或不含待测化合物。在 CO2 培养箱中在 37℃ 下培养细胞 24 小时。

2. 向板中加入 10μL 不同浓度的待测物质。

3. 在培养箱中将培养板培养适当时间（如 6、12、24 或 48 小时）。

4. 向板的每个孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要将气泡引入孔中。

5. 将平板在培养箱中孵育 1-4 小时。

6. 在读板之前，在定轨振荡器上轻轻混匀。

7. 使用酶标仪测量 450nm 处的吸光度。

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