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背景：

成纤维细胞生长因子 9（FGF9）又称胶质激活因子或肝素结合生长因子 9，是成纤维细胞生长因子（FGF）家族的成员。成纤维细胞生长因子家族成员具有广泛的有丝分裂和细胞存活活性:，参与多种生物过程，包括胚胎发育、细胞生长、形态发生、组织修复、肿瘤生长和侵袭。这种蛋白质是作为一种分泌因子分离出来的，对培养的神经胶质细胞具有生长刺激作用。在神经系统中，这种蛋白主要由神经元产生，可能对胶质细胞的发育很重要。研究发现，小鼠同源基因的表达依赖于声子刺猬（Shh）信号传导。缺乏该同源基因的小鼠表现出雄雌性别逆转的表型，这表明它在睾丸 胚胎发生中的作用。FGF9在胚胎发育、细胞增殖、细胞分化和细胞迁移的调控中发挥着重要作用。FGF9 可能在神经胶质细胞发育过程中的生长和分化、脑组织损伤后修复和再生过程中的神经胶质增生、神经元细胞的分化和存活以及神经胶质肿瘤的生长刺激中发挥作用。

标记：

1.将细胞培养基与EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU标记培养基。

2.提前将2×EdU标记培养基预热，然后将150微升2×EdU标记培养基与等体积细胞培养基混合，获得1×EdU溶液。

【注】：①不建议替换全部培养基，这样可能会影响细胞增殖的速度。②配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜。

3.孵育细胞2 h，弃培养基。

【注】：①培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态。②大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2 h的孵育时间。

4.以1xPBS清洗细胞两次，每次5 min, 以除去未掺入DNA的EdU残留。

【注】：对于贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。

实验步骤：

1. 将细胞以 104-105 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板 中，加入 100μL 培养基，含或不含待测化合物。在 CO2 培养箱中在 37℃ 下培养细胞 24 小时。

2. 向板中加入 10μL 不同浓度的待测物质。

3. 在培养箱中将培养板培养适当时间（如 6、12、24 或 48 小时）。

4. 向板的每个孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要将气泡引入孔中。

5. 将平板在培养箱中孵育 1-4 小时。

6. 在读板之前，在定轨振荡器上轻轻混匀。

7. 使用酶标仪测量 450nm 处的吸光度。

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