- 柠檬酸合酶(CS）生化检测试剂盒
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柠檬酸合酶(CS）生化检测试剂盒
100管/48样 50管/24样 25管/12样
EY-01S18
测定意义：
CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环第一个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在 412nm处有特征吸光值。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂一：液体×1瓶，室温保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×2瓶，－20℃保存。临用前加入22mL试剂二，现配现用。
试剂四：液体×1支，4℃保存。
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g， 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
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（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T
=1608×△÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/g鲜重) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T
=1608×△A÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1608×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T
=1608×△A
ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。