商品属性：

产品名称：线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶生化检测试剂盒

规格：100管/96样 25管/24样 

货号 : EY-01S16

测试方法:微量法　紫外分光光度法　　

分类：辅酶Ⅰ系列

商品详情：

测定意义

复合体Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ，同时可使O2还原生成O2.-，是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。

测定原理

复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+，在340nm下测定NADH的氧化速率计算出该酶活性的大小。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

ADH测定操作：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、将试剂二在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

3、操作表：

将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和反应1min后的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。

注意：若A1-A2大于0.5，需将样本用提取液稀释，使A1-A2小于0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

NAD-MDH活力单位的计算：

1、血清（浆）NAD-MDH活力的计算

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=6430×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T =6430×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（2000×V样÷V样总）÷T=3.215×ΔA

V反总：反应体系总体积，8×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；2000：细胞或细菌总数，2000万。

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