- 食品中亚硝酸盐含量生化检测试剂盒
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商品属性:
产品名称:食品中亚硝酸盐含量生化检测试剂盒
规格:100管/96样 50管/48样
货号 : EY-01S195
测试方法:微量法 可见分光光度法
分类:氮代谢系列
商品详情:
测定意义:
在食品中,亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更安定,在食品加工业中作为保色剂,以维持肉制品的良好外观,并防止肉毒梭状芽孢杆菌的产生,提高食用肉制品的安全,但是人体长期摄入亚硝酸盐过量的食品,可诱发消化系统癌变。
测定原理:
在酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物,再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物,在540nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵或匀浆器、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
粗酶液提取:
1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。
3、血清等液体:直接测定。
ADH测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、将试剂二在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。
3、操作表:
试剂名称(μL)
测定孔
样本
20
试剂二
760
试剂三
10
试剂四
10
将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中,混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和反应1min后的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2。
注意:若A1-A2大于0.5,需将样本用提取液稀释,使A1-A2小于0.5,可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
NAD-MDH活力单位的计算:
1、血清(浆)NAD-MDH活力的计算
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=6430×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T =6430×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V样÷V样总)÷T=3.215×ΔA
V反总:反应体系总体积,8×10-4 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;2000:细胞或细菌总数,2000万。
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